ELISA试剂盒常见问题处理
出现问题
出现问题的原因
解决办法
曲线
OD值不正常
试剂盒未回温
试剂盒回温到25℃
温度控制不好
控制正确温度
孵育时间不准确
控制孵育时间
洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加
洗涤4-5次,每孔250ul,然后拍干
阳光直射,对着风直接吹
避风避光
酶标仪的波长错误
酶标仪的波长450nm
抗体的稀释错误
正确的稀释抗体
水质问题
用娃哈哈矿泉水代替
白 板
洗涤液配制错误
正确的配制洗涤液
少加液体(抗体、酶标记物、A液、B液)
正确的步骤加液体
错加液体
无 梯 度
标准品也污染
换标准品点板
控制温度时间在做一次
人为点板
/
线 性 不 好
回 收 率
空白管阳性高
样本本身就是阳性样本
换阴性样本做回收率
空白管在实验中被污染
实验中防止交叉污染
水质原因
偏 高
添加量不准确
精准的添加量
添加浓度不适合
添加合适的浓度
取液吹干量多
准确的取液吹干
取到其它相层液体
取需用相吹干
复溶液未稀释或加入量少
正确的稀释复溶液
偏 低
取液吹干量少
复溶液稀释错误或加入量多
假阴、阳性
点复溶液验证
实验操作原因
吸取到其它相吹干
离心不彻底
延长离心时间
样本的污染
更换样本
乳化未处理完全
温浴(70℃)处理乳化现象
仪器试剂原因
离心管未清洗干净
正确的洗涤器具
有机溶剂的影响
做试剂空白看影响结果
衍生化试剂原因(长时间衍生化试剂变质)
更换衍生化试剂
与曲线好坏相关
保证曲线的正常
金标检测(T)线颜色较浅
尿液pH偏碱性
用0.01M HCl调节尿液pH值到7.0左右。
尿样滴加过多
重新测定,尿样按照说明书,控制在2滴
尿液过于混浊
将尿液离心后,取上清液重新测定
金标质控(C)线不出现
检测卡由于高温、受潮等原因失效
尿样需要重新检测。
过了有效期失效。
该批号的金标应丢弃处理,尿液需要重新检测
操作过程中检测卡没有平放,导致液体样品直接冲过检测区
尿样需要重新检测,且检测卡平放于桌面上再加样。
尿液样品中含有较高的抑制或者干扰抗原抗体反应的物质(比如明矾、小苏打、氧化剂、肌酐等)
该尿液的检测结果无效
金标卡上在除了T和C线之外的其他地方出线
金标卡上的划痕;胶体金在跑板过程中没有完全跑干净而遗留在卡上的痕迹;
该检测卡结果不可信,尿液需要重新检测。
实验重复性不好
操作人员的不一致,取样的不一致,样本数量的多少,加样时间的长短,洗涤条件不一致,加样量不一致
尽量保持的实验一致性
分析软件的使用
不能设置和保存
正确的设置和保存
如何判断曲线的好坏和分析结果
正确的判断曲线的好坏和分析结果