ELISA的实验结果计算

作为ELISA的最后一步，检测结果的计算对整个实验十分重要。

以夹心法为例。

1.ELISA的样本通常要设置1~2个复孔进行检测，分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的20%。

2.样本的OD（吸光度）平均值要减去标准品浓度为0时的OD平均值。

3.建立标准曲线

在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线（X轴上为标准品浓度，Y轴为对应的OD值）。推荐使用ELISACALC软件。

详细步骤如下：

第一步: 输入 OD 值和标准品浓度

此处选用的是百分率 logit 模型。

0输入数据。这里中间的数据框中要输入SO至S5的度与吸光值。注意，一定不能没有SO。在左侧“扣除本底”处可以输入空白孔 (只加显色液及终止液，) 的吸光值，如果没有做，则就不用填了

第二步：“回/拟合模型”选择“logit-log”方式。

第三步：点击“回归/拟合”显示直线。

第四步：点“回归方程”显示参数，点“由Y计算 X”计算样品与质控浓度。在空格中输入样品或质控的吸光值，回车或点击“计算”。即能计算对应的浓度。

一般情况按照说明书推荐方法拟合标曲，可以用软件绘制也可以手动制作。标曲呈现s型曲线，两端趋于水平，中间趋于线性，中间部分为较佳的检测范围。当标准品的量超过与包被抗体结合的量，此时标准品已饱和，在增加标准品的量，其OD值不再变化，故当标准品达到一定浓度后，曲线趋于水平。按照科学分析方法，如果存在奇异点或者污点，直接采用线性分析不理想，要对拟合曲线的几个点进行取舍，同时可以改用双对数直线拟合或者四参数曲线拟合。

此处选用的是“Logistic 曲线拟合2(四参数模型）

1)输入数据。这里中间的数据框中要输入标准品STAA至STAF的度(后面测出的结果的单位和此标准品单位一致)与吸光值。在左侧“扣除本底”处可以输入空白孔(只加显色液及终止液，)的吸光值，如果没有做，则就不用填了

2）“回/拟合模型”选择“Logistic 曲线拟合2(四参数)”方式

3)点击“回归/拟合”显示标准曲线

4)点“回归方程”显示参数(内容可以直接复制)

5)点“由Y计算X”计算样品浓度。在空格中输入样品的吸光值，回车或点击“计算”即能计算对应的浓度。(技巧:可以在表格中复制所有样品的Y 值，在软件中点击“粘贴”按钮，就可以得出所有的 X 值哦!全部计算完可以点击“复制”按钮将结果复制下来，粘贴到 EXCEL 表格里面)另:若数值超出曲线范围，则有可能得不到结果，如下图0.468的Y值所示。

切记，在实验过程中，要根据各个实验本身的特点，选择最适合的曲线拟合模型，才能得到最合理的实验结果，一般情况下，需要综合考虑标准曲线的趋势走向以及R值的大小，来最终选择适合自己的回归方程。